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          產(chǎn)品展示/ Product display

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          NHS活化瓊脂糖凝膠FF

          NHS活化瓊脂糖凝膠FF
          英文名稱:NHS activated-Berpharose FF
          貨號(hào):B2828
          規(guī)格:10ml
          本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其它用途!

          • 產(chǎn)品型號(hào):
          • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
          • 更新時(shí)間:2024-10-29
          • 訪  問(wèn)  量:617
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          聯(lián)系電話:13764793648

          詳細(xì)介紹

          NHS活化瓊脂糖凝膠FF


          英文名稱:NHS activated-Berpharose FF


          貨號(hào):B2828


          規(guī)格:10ml


          1.      產(chǎn)品介紹


          NHS-瓊脂糖凝膠FF是一種將瓊脂糖凝膠微球用NHS活化形成的生物親和層析分離


          介質(zhì)。該產(chǎn)品保留了瓊脂糖極-好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu),同生物活性大分子有很好的相容性,具有載量高、非特異性吸附少和流速快等特點(diǎn)。本活化的瓊脂糖凝膠能溫和地同氨基基團(tuán)反應(yīng),特別適合偶聯(lián)抗體、鏈霉親和素、酶和核酸等功能性生物大分子。


          2.規(guī)格


          1ml、10ml、100ml、500ml 使用方法


          應(yīng)用舉例:


          NHS-瓊脂糖凝膠FF偶聯(lián)抗體


          ①配制抗體:取100 mg IgG用10 ml偶聯(lián)緩沖液(0.2 M NaHCO3,0.5 M NaCl,pH8.3)溶解。


          ②偶聯(lián)反應(yīng):取10 ml NHS-瓊脂糖凝膠FF,用50 ml的1 mM HCl分三次清洗去除保存液,之后立即加入到抗體偶聯(lián)溶液中,4℃振蕩偶聯(lián)6 h或者偶聯(lián)過(guò)夜。


          ③封閉:上述溶液過(guò)濾,用50 ml偶聯(lián)緩沖液清洗偶聯(lián)后的凝膠,用10 ml封閉緩沖液(0.2 M NaHCO3,0.5 M NaCl,0.5 M乙醇胺,pH8.3)于室溫振蕩4 h(或者過(guò)夜)以封閉未偶聯(lián)的基團(tuán),之后用20 ml蒸餾水清洗干凈即可。


          ④檢測(cè):用SDS-PAGE檢測(cè)偶聯(lián)前后的反應(yīng)液并計(jì)算偶聯(lián)效率,偶聯(lián)好的填料根基特性測(cè)定功能和載量。


           

          5.注意事項(xiàng):


          1)偶聯(lián)緩沖液可以是碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液,但絕對(duì)不能使用氨基緩沖體系(如Tris-HCl緩沖液)。


          2)穩(wěn)定的配基可以直接溶于0.2 M NaHCO3,可適當(dāng)提高偶聯(lián)溫度(如室溫)將偶聯(lián)時(shí)間縮短至1~2 h。


          3)如對(duì)配基的穩(wěn)定性不夠了解,可以選擇不同pH值緩沖液和不同溫度,用0.5~1 ml配基相應(yīng)濃度的溶液,在無(wú)填料的條件下模擬偶聯(lián)反應(yīng),觀察溶液是否會(huì)產(chǎn)生沉淀。有沉淀產(chǎn)生說(shuō)明偶聯(lián)效果不佳,可適當(dāng)降低緩沖液pH值或溫度。同時(shí)可以添加約5%的甘油或PEG保護(hù)蛋白,避免產(chǎn)生沉淀。


          4)根據(jù)偶聯(lián)蛋白的穩(wěn)定性選擇合適的偶聯(lián)pH值和溫度。偶聯(lián)較適pH值為pH7.5~9.0,室溫或4℃均可。提高偶聯(lián)溫度能夠提高配基的偶聯(lián)效率。


          5)偶聯(lián)蛋白溶液的濃度以5~15 mg/ml為佳。偶聯(lián)凝膠體積和配基溶液的體積比以1:0.5~1:2.0為佳。


          6)如果偶聯(lián)的配基不穩(wěn)定,可于4℃振蕩偶聯(lián)1~12 h以維持配基的活性。偶聯(lián)配基后應(yīng)盡快清洗填料,避免配基在高pH條件下失活。


          7)封閉緩沖液一般使用帶氨基的小分子試劑,如乙醇胺、Tris等。于pH8~9、室溫條件下封閉數(shù)小時(shí)可完-全封閉。推薦封閉緩沖液:0.5 M乙醇胺,0.5 M NaCl,pH8.3或0.1 M Tris-HCl,pH8.5。


          8)偶聯(lián)中盡量使用溫和的混勻方式,如振蕩、翻轉(zhuǎn)和旋轉(zhuǎn)等,如使用磁力攪拌器或者機(jī)械攪拌,需要降低攪拌速度,使填料能夠混勻完-全懸浮即可,避免劇烈攪拌導(dǎo)致凝膠微球破碎。


          9)NHS-瓊脂糖凝膠FF需現(xiàn)取現(xiàn)用,避免取出后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致活性降低。


          10)僅供科研實(shí)驗(yàn)使用


          NHS活化瓊脂糖凝膠FF

           


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