信帆生物提供腺病毒包裝系統(tǒng)及病毒實(shí)驗(yàn)！

腺病毒載體是以腺病毒為原型進(jìn)行基因功能改造而成的無外殼的雙鏈DNA病毒，由于其具有宿主范圍廣、可感染分裂和非分裂細(xì)胞、高滴度制備、外源基因裝載容量大等優(yōu)點(diǎn)，重組腺病毒已越來越廣泛地被應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和研究試驗(yàn)中，并成為世界上zui常用的基因治療載體之一。

病毒包裝系統(tǒng)及病毒實(shí)驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)：

1、可感染的細(xì)胞種類多，宿主廣泛；
2、感染效率高，特別適合質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染效率低的細(xì)胞，如原代細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等，且目的蛋白表達(dá)水平高；
3、可包裝大片段的外源基因，高達(dá)10kb；
4、不整合到細(xì)胞染色體中，生物安全性高。
腺病毒包裝技術(shù)主要原理是將目的片段克隆到腺病毒表達(dá)載體上，表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒通過重組導(dǎo)入腺病毒包裝細(xì)胞進(jìn)行包裝，包裝好的病毒進(jìn)一步進(jìn)行擴(kuò)增和滴度測定。

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AdMAX系統(tǒng)：
AdMax包裝系統(tǒng)是通過Cre/loxP 獲得重組病毒，這個(gè)過程發(fā)生在HEK293細(xì)胞中，從而避免在細(xì)菌中重組。將克隆了外源基因的腺病毒穿梭質(zhì)粒與攜帶了腺病毒大部分基因組的包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，利用Cre/loxP系統(tǒng)的作用實(shí)現(xiàn)重組，產(chǎn)生重組腺病毒。這個(gè)系統(tǒng)有多種優(yōu)勢(shì)，包括操作簡便、重組效率高、獲得的病毒產(chǎn)率高、目的基因的表達(dá)水平高（因?yàn)閙CMV啟動(dòng)子比hCMV啟動(dòng)子強(qiáng)若干倍）等。
可根據(jù)不同的研究需求構(gòu)建腺病毒穿梭載體，如用于RNAi的腺病毒載體、用于基因過表達(dá)的腺病毒載體、用于啟動(dòng)子活性研究的腺病毒載體等

技術(shù)流程:
1.獲得目的基因序列；
2.構(gòu)建病毒表達(dá)載體質(zhì)粒；
3.表達(dá)載體質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒重組；
4.感染HEK293，包裝出病毒；
5.病毒擴(kuò)增、濃縮；
6.滴度測定。

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