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          白介素10(IL-10)ELISA試劑盒檢測前準(zhǔn)備工作

          更新時間:2017-09-19      瀏覽次數(shù):869
             白介素10(IL-10)ELISA試劑盒檢測前準(zhǔn)備工作
            白介素10(IL-10)ELISA試劑盒檢測之前需要做哪些準(zhǔn)備工作?下面就讓小編帶您做個簡單的了解。
            1.試劑盒自冰箱中取出后應(yīng)置室溫平衡20分鐘;每次檢測后剩余試劑請及時于2~8℃保存。
            2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。
            3.標(biāo)準(zhǔn)品:加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0.25ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品瓶中使IL-1β終濃度達(dá)到250pg/ml,靜置15分鐘后輕輕混懸待*溶解,用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。(標(biāo)準(zhǔn)曲線取七個點,zui高濃度為250pg/ml,標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接加入作為0濃度.)
            白介素10(IL-10)ELISA試劑盒洗滌方法:
            自動洗板機(jī)或人工洗板:每孔洗滌液為300ul,注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次。zui后一次洗板完成后將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍干。
            實驗過程需自備的材料:
            1.不同規(guī)格的加樣槍及相應(yīng)的槍頭;2.酶標(biāo)儀;3.自動洗板機(jī);4.去離子水或雙蒸水;
            白介素10(IL-10)ELISA試劑盒操作步驟:
            1.通過計算并確定一次性實驗所需的板條數(shù),取出所需板條放置在框架內(nèi),暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封,保存于4℃。
            2.建議設(shè)置本底較正孔,即空白孔,設(shè)置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實驗均需做標(biāo)準(zhǔn)品對照并畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
            3.分別將標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100ul/孔)加入相應(yīng)孔中,用封板膠紙封住反應(yīng)孔,室溫孵育120分鐘。對于血清或血漿標(biāo)本,請加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標(biāo)本,如稀釋量大,請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入,不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補充至100ul。
            4.洗板5次,且zui后一次置厚吸水紙上拍干。
            5.加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔,室溫孵育60分鐘。
            6.洗板5次,且zui后一次置厚吸水紙上拍干。
            7.加入酶結(jié)合物工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔,避光室溫孵育20分鐘。
            8.洗板5次,且zui后一次置厚吸水紙上拍干。
            9.加入顯色劑TMB100ul/孔,避光室溫孵育20分鐘。
            10.加入終止液50ul/孔,混勻后即刻測量OD450值。
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