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文章標題《骨肉瘤中GRM4基因表達和啟動子甲基化的研究及其研究意義》

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研究背景：骨肉瘤是zui常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤。對于那些在診斷的時候沒有發(fā)生轉移的患者,

其5年生存率可達70%。盡管取得了許多進展,然而其余的有轉移的或者對化療不敏感的骨肉瘤患

者,其5年生存率只有20%左右。骨肉瘤的真正病因尚不清楚,其發(fā)生發(fā)展過程是一個包括環(huán)境因

素和遺傳因素的多因素過程。表觀遺傳學的研究進展表明,表觀遺傳改變可引起骨肉瘤的惡

性轉化和進展,讓我們可以更好地了解這種腫瘤的分子機制。代謝型谷氨酸受體4(mGluR4)主要

是突觸前谷氨酸受體,其在控制運動的基底神經(jīng)節(jié)環(huán)路的數(shù)個關鍵位置表達,參與突觸前興奮性

谷氨酸信號的神經(jīng)傳遞。研究表明代謝型谷氨酸受體4(mGluR4)在多種腫瘤中表達并與其進組預

后相關,在成骨細胞和破骨細胞中mGluR4的表達表明谷氨酸信號參與骨形成和骨吸收過程中的細

胞分化與調控。目的：研究表明在骨肉瘤中代謝型谷氨酸受體4(mGluR4)呈高表達狀態(tài)。本研究

檢測63例骨肉瘤患者的骨組織和105例非腫瘤患者的骨組織中GRM4基因啟動子甲基化狀態(tài)以及表

達情況,探討GRM4基因啟動子甲基化與其表達的關聯(lián)及其在骨肉瘤中的研究意義。方法：研究對

象及標本：收集2010年1月-2012年7月期間在廣西醫(yī)科大學*附屬醫(yī)院診療的骨肉瘤患者組織

標本63例。所有患者術前未進行相關抗癌治療措施,所有標本經(jīng)過病理學檢查確認為骨肉瘤。取

得的標本在切除后立即置入液氮罐冷凍保存,然后轉到-80℃條件下低溫保存。取得105例非腫瘤

患者的骨組織作為對照組,同樣經(jīng)液氮冷凍低溫保存,后轉到-80℃低溫冰箱保存用于基因甲基

化、RNA和蛋白測定。并且收集患者的研究和組織學資料,如年齡、性別、Enneking分期、轉

移、腫瘤部位、組織學類型。所有患者均進行隨訪,術后前2年內每2個月進行1次隨訪,在接下來

的隨訪過程中每6個月隨訪一次,平均隨訪時間為20個月(1月-36月)。這項研究由廣西醫(yī)科大學

附屬*醫(yī)院倫理委員會批準,每一位患者在告知的情況下簽署知情同意書。GRM4基因啟動子甲

基化的測定：通過焦磷酸測序的方法檢測骨肉瘤組織及非腫瘤患者的骨組織中GRM4基因啟動子

的甲基化狀態(tài)。GRM4基因mRNA表達的測定：通過RT-PCR的方法測定骨肉瘤組織及非腫瘤患者的

骨組織中GRM4基因的mRNA水平的表達。GRM4基因蛋白表達的測定：通過Western Blot(WB)的方

法測定骨肉瘤組織及非腫瘤患者的骨組織中GRM4基因的蛋白水平的表達。統(tǒng)計學分析：應用

SPSS 16(IBM,Armonk,NY,USA)進行統(tǒng)計分析。采用獨立樣本t檢驗來比較骨肉瘤組織和癌旁組織

的甲基化水平、基因表達和蛋白表達的差異。用斯皮爾曼相關性(Spearman correlation)檢測

GRM4基因甲基化和基因表達之間的相關性。GRM 4甲基化水平與研究病理特征(包括年齡,性別,

階段,外科分期,病理組織學類型,位置,和轉移)之間的關系則用卡方檢驗或Fisher確切概率法。

應用Kaplan-Meier分析和Log-rank檢驗分析骨肉瘤患者的總生存期(OS)、無復發(fā)生存率(RFS)和

無進展生存期(PFS),其中需要排除在末次隨訪仍然存活的患者。P值<0.05,被認為有統(tǒng)計學意

義。結果：在骨肉瘤組織及非腫瘤患者的骨組織中GRM4基因啟動子甲基化的情：通過焦磷酸測

序的方法檢測GRM4基因啟動子甲基化狀態(tài)。在骨肉瘤組織及非腫瘤患者的骨組織中平均甲基化

水平分別是3.79±0.83%和4.08±0.74%,其中P<0.05。這說明相對于非腫瘤患者的骨組織而言,

在骨肉瘤組織中GRM4基因啟動子表現(xiàn)為低甲基化。在骨肉瘤組織及非腫瘤患者的骨組織中GRM4

mRNA水平的表達情況：用RT-PCR的方法檢測骨肉瘤組織及非腫瘤患者的骨組織中GRM4 mRNA水平

的表達情況。在骨肉瘤組織中GRM4 mRNA的灰度值為1.71±0.15,而在正常骨組織中其值為

0.56±0.13,P<0.05,有統(tǒng)計學意義。其結果表明與非腫瘤患者的骨組織中相比,在骨肉瘤組織中

GRM4mRNA呈現(xiàn)高表達。在骨肉瘤組織及非腫瘤患者的骨組織中GRM4蛋白水平的表達情況：用免

疫印跡分析方法(WB)的方法檢測骨肉瘤組織及非腫瘤患者的骨組織中GRM4蛋白水平的表達情

況。在骨肉瘤組織中的值為1.28±0.08,而在正常骨組織中其值為0.35±0.05,P<0.05,有統(tǒng)計學

意義。其結果表明與非腫瘤患者的骨組織中相比,在骨肉瘤組織中GRM4蛋白呈現(xiàn)高表達。