IgM類單克隆抗體純化試劑盒使用說(shuō)明書

                                                            立可純C080202（50ML純化量）

試劑原理：

本試劑盒利用不同類別免疫球蛋白結(jié)構(gòu)特性，通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)分析驗(yàn)證而得到的一個(gè)與傳統(tǒng)純化*不同的精細(xì)的具有高活性、高產(chǎn)率、快速以及良好重復(fù)性的單克隆抗體的純化方法，本試劑盒所用材料對(duì)人體沒(méi)有損害，安全環(huán)保。

試劑特點(diǎn)：

           本試劑盒特點(diǎn)在于純化操作的簡(jiǎn)單化、所得抗體的高活性和高純度。實(shí)驗(yàn)表明，本試劑盒可以得到95%左右純度的抗體；并且由于配方考究，抗體在純化過(guò)程中幾乎沒(méi)有損傷，*保持應(yīng)有的活性，實(shí)際應(yīng)用*。

適用范圍：

         本試劑盒僅適用于小鼠IgM類單克隆抗體腹水的純化，不能用于其它Ig類或亞類單克隆抗體腹水的純化實(shí)驗(yàn)，如需要可選擇立可純系列其它貨號(hào)的純化試劑，它能為您帶來(lái)滿意結(jié)果。

試劑組成：

純化步驟：

1、將單克隆抗體腹水從冰箱中取出，室溫避光放置15分鐘，然

后用涼水邊沖邊搖勻快速解凍。

2、將化開的單克隆抗體腹水12000RPM 4-37℃離心10-20分鐘。

3、先吸棄zui上面浮沫和油脂，然后將上清轉(zhuǎn)出到另一個(gè)干凈容器或離心管；按每1毫升單克隆抗體腹水加入純化液A 1.3毫升，室溫避光倒轉(zhuǎn)20分。

4、8000RPM 4-37℃離心10-20分鐘，沉淀用純化液B溶解到原單克隆抗體腹水1/2體積；再按每毫升加入純化液C 1.2毫升，室溫避光倒轉(zhuǎn)10分鐘。

5、8000RPM 4-37℃離心10-20分鐘，棄沉淀收集上清；每1.1毫升上清液加純化液D 1.2毫升，室溫避光倒轉(zhuǎn)20分鐘。

6、8000RPM 4-37℃離心10-20分鐘，收集沉淀用純化液B收集溶解沉淀到原單克隆抗體腹水體積的1/2。

7、透析袋用PBST浸泡3-5分鐘，然后用手揉捏數(shù)次，自來(lái)水沖凈后接純水沖洗干凈，將純化好的抗體放入用透析夾或繩扎緊。

8、透析液用純水稀釋30倍，將要透析的抗體袋子放入?？贵w體積：透析液體積=1:50，4℃攪拌透析每次1小時(shí)，共3-4次。

9、8000RPM 4-37℃離心10-20分鐘，收集上清測(cè)蛋白濃度并調(diào)控在5mg/ml左右zui后加10/萬(wàn)NaN3防腐并除菌過(guò)濾4℃?zhèn)溆谩?/SPAN>

注意事項(xiàng)：

1、溶血和腐敗的腹水不得用于純化（血性腹水離心后除去紅細(xì)胞等可正常純化）。

2、離心溫度不要超過(guò)37℃。

3、操作和量取試劑要細(xì)致。

4、不攪拌透析每次時(shí)間不得低于2小時(shí)。