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          GENOMIC大鼠S100B蛋白ELISA試劑盒介紹

          更新時間:2014-07-28      瀏覽次數(shù):1103

            

          GENOMIC試劑盒,全部采用完整德國生物試劑工藝,*的抗體生物試劑的具有高靈敏度,重復(fù)性好的ELISA試劑盒。自從問世以來,深受廣大科研用戶的好評。

              下面為大家介紹一下,GENOMIC品牌的大鼠S100B蛋白ELISA試劑盒:

          本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中S100B蛋白(S-100B)含量。

          實驗原理

          本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本大鼠S100B蛋白(S-100B)水平。用純化的大鼠S100B蛋白(S-100B)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入S100B蛋白(S-100B),再與HRP標記的S100B蛋白(S-100B)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的S100B蛋白(S-100B)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品大鼠S100B蛋白(S-100B)濃度。 

          試劑盒組成 

          1

          30倍濃縮洗滌液

          20ml×1瓶

          7

          終止液

          6ml×1瓶

          2

          酶標試劑

          6ml×1瓶

          8

          標準品(240 ng/L

          0.5ml×1瓶

          3

          標包被

          12孔×8條

          9

          標準品稀釋液

          1.5ml×1瓶

          4

          樣品稀釋液

          6ml×1瓶

          10

          說明書

          1份

          5

          顯色劑A液

          6ml×1瓶

          11

          封板膜

          2張  

          6

          顯色劑B液

          6ml×1/瓶

          12

          密封袋

          1個

          標本要求

          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

          2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

          操作步驟

          1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

          120 ng/L

          5號標準品

          150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

          60 ng/L

          4號標準品

          150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

          30 ng/L

          3號標準品

          150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

          15 ng/L

          2號標準品

          150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

          7.5 ng/L

          1號標準品

          150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

           

           

          1. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
          2. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
          3. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
          4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
          5. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
          6. 溫育:操作同3。
          7. 洗滌:操作同5。
          8. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
          9. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

          計算

            以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 

           

           

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