生物素瓊脂糖凝膠FF的使用方法是什么？

相關(guān)介紹： 

　　生物素瓊脂糖凝膠FF是一種將D-生物素鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質(zhì)。該介質(zhì)中的生物素配基能高度特異性親和親和素、鏈霉親和素，親和力非常高，可用于親和素、鏈霉親和素及其偶聯(lián)物的固定化，固定化后的產(chǎn)品可應(yīng)用于診斷檢測，蛋白純化等。也可直接用于削弱親和力的親和素、鏈霉親和素的純化。

技術(shù)指標(biāo)：

使用方法：

1、色譜柱裝填

（1）所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體最好做脫氣處理。

（2）在柱子下端加入蒸餾水，以除去柱子中的空氣，關(guān)閉柱子出口，在柱內(nèi)保留少量的蒸餾水。

（3）將瓊脂糖凝膠連續(xù)倒入柱子時(shí)，要用玻璃棒的緊靠柱子內(nèi)壁引流，以減少氣泡的產(chǎn)生，讓填料先自然沉降。

（4）柱壓不超過0.3MPa，如果裝柱系統(tǒng)中無法測柱壓，則正常流速下填裝。

（5）填裝好的生物素瓊脂糖凝膠FF柱用2-5個(gè)柱體積的結(jié)合緩沖溶液平衡，建議流速100cm/h，平衡后的柱子可以用于親和素、鏈霉親和素的固定化或純化。

2、上樣

（1）緩沖液選擇：一般選用pH6-8的結(jié)合緩沖液，常用緩沖液有10-00mM 磷酸鈉緩沖液、20-200mM Tris-HCl緩沖液等。在緩沖液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl，以消除離子交換作用。在初次使用生物素瓊脂糖凝膠FF時(shí)，推薦使用50mM PBS（50 mM NaH2PO4，0.5M NaCl，NaOH調(diào)節(jié)pH 7.4）作為結(jié)合緩沖液。

（2）樣品處理：樣品的緩沖液應(yīng)與所選結(jié)合緩沖液一致。為保證緩沖液一致，可以在結(jié)合緩沖液中破碎細(xì)菌、或調(diào)解pH與結(jié)合緩沖液一致、或交換至結(jié)合緩沖液（常用方法有透析、超濾、脫鹽柱換液等）、或用結(jié)合緩沖液稀釋2-10倍等。樣品上柱前應(yīng)0.45μm過濾。

3、洗脫

（1）生物素瓊脂糖凝膠FF如結(jié)合了親和素、或鏈霉親和素之后，由于親和力非常高，通常很難洗脫，可作為固定相用于其他物質(zhì)的檢測或純化，比如固定了鏈霉親和素-抗原的融合蛋白可用于純化對應(yīng)的抗體。

（2）如結(jié)合了削弱親和力的親和素、或鏈霉親和素，可在結(jié)合緩沖液中加入1-5mM的D-生物素作為洗脫緩沖液，通過競爭的方法洗脫，比如本公司的r-SA2、r-SA3、r-cSA3等產(chǎn)品均通過該法純化獲得。

4、除了柱層析以外，也可能通過孵育的方式固定親和素、鏈霉親和素。

5、在位清洗

（1）用于純化時(shí)，多次使用后需要再生，本產(chǎn)品耐受一定的堿性，推薦使用2-5個(gè)柱體積的0.1M NaOH溶液反向清洗柱子，進(jìn)行再生。

（2）其他方法，比如1-2M NaCl、70%乙醇、30%異丙醇等，也可用于該介質(zhì)的再生。

生物素瓊脂糖凝膠FF的使用方法是什么？