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          更新時(shí)間:2018-03-21      瀏覽次數(shù):2082

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          Real -Time PCR,即實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并進(jìn)行解析的方法,它是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì),并通過Real -Time PCR檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)程中的熒光信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),zui終對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理的方法。Real -Time PCR自1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出以來,廣泛應(yīng)用于生物研究的各個(gè)領(lǐng)域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探針法兩種。

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          PCR實(shí)驗(yàn)代測(cè),熒光定量PCR代測(cè)服主要儀器及耗材
          旋渦振蕩器 :上海青浦瀘西儀器廠產(chǎn)品
          手握式電動(dòng)勻漿機(jī):德國(guó)FLUKO 公司產(chǎn)品
          低溫冷凍離心機(jī):Sigma(3K15)公司產(chǎn)品
          Real-time檢測(cè)儀:ABI (ABI-7300)公司產(chǎn)品
          超純水分離系統(tǒng):美國(guó)LABCONCO公司
          離心管及10μL、200μL、1000μL槍頭等常規(guī)耗材均為國(guó)產(chǎn);RNA提取過程中所需的離心管、槍頭等耗材經(jīng)過0.1%的DEPC水浸泡過夜,121℃滅菌30min,烘干后備用。
           
          PCR實(shí)驗(yàn)代測(cè),熒光定量PCR代測(cè)服實(shí)驗(yàn)室試劑的操作
          1)所用的所有溶液都應(yīng)該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
          2)所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾的去離子水,用0.22μm過濾的,并且是高壓滅菌。
          3)在20℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類的抗微生物劑,在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。
          4)所用試劑都應(yīng)該以大體積配制,實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。
          5)所有試劑和樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
          6)新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)。
          7)樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存。

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